¿Qué es western blotting?

La técnica de Western Blotting, también conocida como inmunoblotting o blotting de proteínas, es una herramienta de biología molecular que se utiliza para detectar y cuantificar proteínas específicas en una muestra.

El Western Blotting se basa en la separación de las proteínas por tamaño y su transferencia a una membrana de nitrocelulosa o polivinilideno difluoruro (PVDF) después de ser separadas por electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Esta transferencia permite la visualización y detección de proteínas individuales utilizando anticuerpos específicos.

A continuación, se describen los pasos generales del procedimiento de Western Blotting:

1. Preparación de la muestra: Las proteínas de interés se extraen de la muestra biológica utilizando técnicas de lisis celular y se cuantifican para obtener una concentración adecuada.

2. Electroforesis en gel: Las proteínas se separan por tamaño utilizando geles de poliacrilamida. Las proteínas migran a través del gel en función de su tamaño y carga, siendo las proteínas más pequeñas las que migran más lejos.

3. Transferencia a la membrana: Después de la electroforesis, las proteínas se transfieren de manera eficiente desde el gel al material de membrana. Esto se logra aplicando una corriente eléctrica que mueve las proteínas a través del gel hacia la membrana.

4. Bloqueo: La membrana se trata con una solución de bloqueo para evitar la unión no específica de los anticuerpos y reducir el ruido de fondo.

5. Incubación con anticuerpos: Se agregan anticuerpos específicos contra la proteína de interés a la membrana durante un período de incubación. Estos anticuerpos se unen específicamente a la proteína deseada, formando un complejo antígeno-anticuerpo.

6. Detección de la proteína: Se utilizan diferentes métodos de detección para visualizar y cuantificar la proteína de interés. Los métodos más comunes incluyen el uso de enzimas o fluoróforos conjugados a un anticuerpo secundario que se une al anticuerpo primario. Estos métodos generan una señal que puede ser capturada y analizada utilizando diferentes instrumentos como un lector de fluorescencia o una cámara digital.

El Western Blotting es una técnica altamente sensible y específica que se utiliza para estudiar una amplia variedad de aspectos de las proteínas, como su expresión, localización, modificación y cuantificación relativa en diferentes muestras. Es una herramienta ampliamente utilizada en investigación biomédica y diagnóstico clínico.